如果片段连入表达载体,酶切鉴定目的带特别淡时,表达蛋白时会受影响吗?

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/04/28 21:52:34

首先肯定酶切鉴定目的条带很淡不会影响后续的蛋白表达.
表达载体的构建是否成功,酶切鉴定只是第一步鉴定结果,目的条带的深浅有很多影响因素,例如酶切时质粒浓度,插入片段的长短,是否酶切完全等.最重要的是,要将获得的构建质粒送过去测序,如果测序结果正确,这就表明表达质粒构建成功.只要表达质粒构建成功就可以用于后续的蛋白表达.
只要质粒测序正确,目的条带酶切时的条带深浅是与蛋白表达的是否成功没有任何联系.

如果片段连入表达载体,酶切鉴定目的带特别淡时,表达蛋白时会受影响吗? 目的基因连入表达载体后用不用先转入DH5a扩增、酶切鉴定然后再转入BL21? 目的片段连接表达载体后酶切出非特异带为什么我的载体11KB,连接了目的片段.PCR能扩出目的带,双酶切出现了三条带,一条载体,一条目的条带,一条非特异带3KB左右.载体上这两个酶只有一个酶穿刺菌去测序的原理和步骤是什么?特别想知道,他们是怎么切出我连在载体上的目的片段的. 我把我的目的片段连在载体上,菌液送公司测序起始密码子有两个碱基有误,是否很大可能是公司测序的问题?菌液和酶切检测都没有问题!送测序是我自带的加了酶切位点的引物!我的目的片段您好!目的基因跟载体片段连接后成重组质粒,那里面的那些溶液会影响接下来的酶切鉴定吗就是把目的基因和载体片段连接起来的那个连接体系里面的溶液,我接下来要坐酶切鉴定,会对其有影 PCR扩增出目的片段之后为什么要酶切?酶切下来的是目的片段和载体?然后再把它们连起来?很困惑. 为什么篮斑做PCR菌液鉴定也能P出来条带呢我用蓝白斑做的 T载体和目的片段连,为什么篮斑的做PCR菌液鉴定也能P出来条带呢? 目的片段转入表达载体后我用什么方法可以检测我的目的质粒? 目的基因先克隆入克隆载体再亚克隆入表达载体与直接将目的基因克隆到表达载体上有什么好处? 如果将PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接,并转化入宿主大肠杆菌中,写出技术路线（包括基因和载体的连接、转化和鉴定）和关键点. 连接到T载体上面后,做双酶切,条带不正确,目的片段变大是什么原因我的目的片段连载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR,没有条带. 能不能用PCR直接扩增目的片段,然后转入表达载体,代替在克隆载体或dh5a中的扩增转化pET32a一个菌落也不长是什么原因啊我在做分子克隆,克隆了四个片段,要在pET32a载体上表达,可是酶切,连接,转化大肠杆菌BL21以后一个菌落也不长,我已经试过各种载体和目的片段的比例,而为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急加点 kml?但是我转化后菌落长的还可以啊.酶切目的带在1000左右,质粒PCR在750左右了表达载体的构建中目的片段与表达载体的连接最好是几个小时?时间长一点有什么影响么? 重组质粒双酶切带与PCR扩增带大小不一PCR扩增出1kb的带，双酶切(3h)切出的是2kb的带，和载体相比，切出的带不亮，有的根本看不清，可能是目的片段不浓，如果是质粒不纯，我是从单菌落来