RT-PCR出一段目的基因,为什么要把它先TA克隆呢?为什么不能直接把它连接到相应的质粒上呢TA克隆的意义是什么呢?能否讲通俗点呢?如果不进行TA克隆,直接酶切连接到相应的载体上,再筛选阳性

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/13 08:26:27

RT-PCR出一段目的基因,为什么要把它先TA克隆呢?为什么不能直接把它连接到相应的质粒上呢
TA克隆的意义是什么呢?能否讲通俗点呢?如果不进行TA克隆,直接酶切连接到相应的载体上,再筛选阳性的,再测序正确,然后转染细胞,这样不是省事了么?为什么还要进行TA克隆呢?有点百思不带其解,

确实可以不一定要TA克隆.
你可以在设计引物的时候在引物的5'端加上酶切位点,比如你选中XXXYYY位点你可以把引物设计为AA－XXXYYY－AGCT(AGCT 代表你原来的引物序列）.我一般在头上加2个A,这样酶切效果好一些.两个引物可以加相同,也可以不同酶切位点.取决于2点：
1.扩增区没有该位点,（必须知道你扩增区的序列）
2.对应于你的目标分子.
TA克隆的好处在于选择灵活,万一一个位点不好使,同一批质粒还可以用其他酶再切.随时可以扩增.还有方便下游作业,比如说你要连接两端PCR产物,先克隆会比较方便一些.
所以2种方法各有优缺点,你可以根据情况选用.

TA克隆效率比较高，而且如果目的基因序列不明，那么就无法恰当的选择内切酶，所以一般TA克隆后测序，然后再用酶切。

RT-PCR出一段目的基因,为什么要把它先TA克隆呢?为什么不能直接把它连接到相应的质粒上呢TA克隆的意义是什么呢?能否讲通俗点呢?如果不进行TA克隆,直接酶切连接到相应的载体上,再筛选阳性 性染色体只存在于生殖细胞队吗?还有为什么pcR技术扩增目的基因前要已知一段目的基因的核苷酸序列呢 性染色体只存在于生殖细胞队吗?还有为什么pcR技术扩增目的基因前要已知一段目的基因的核苷酸序列呢 PCR技术获取目的基因时为什么要至少经过3次循环才能从DNA分子中分离出目的基因 pcr没把目的基因扩增是什么原因 已知一基因两侧序列,如何将该基因克隆你没明白我的意思，是要从如何获得目的基因上来回答；比如，知道一段蛋白质的mRNA序列，就用RT-PCR制备出cDNA，从而克隆。现在是知道两侧序列…… PCR技术如何获取目的基因呢,另外PCR的过程为什么会扩增出不同长度的链 PCR技术为什么是获取目的基因的途径PCR扩增需要模板,为什么它还是获取目的基因的途径 从克隆载体上PCR出目的基因原理 PCR引物是目的基因中的一段么,还是和目的基因中的某段是互补的? 做RT-PCR时,上下引物退火温度一定要一样吗?内参条带很亮,为什么没有目的基因? pcr为什么要扩增,PCR的目的是获得目的基因片段?但为什么要扩增很多次呢,小菜题不懂.为什么要大量呢 PCR怎么获得目的基因 为什么“利用PCR技术扩增目的基因”是获取目的基因的步骤?（ 为什么检测一些基因往往要用RT-PCR?直接扩增其DNA不行吗? RT-PCR数据分析菜鸟请教大虾：已知目的基因、GAPDH、目的基因/GAPDH比值怎么分析数据呢? PCR技术扩增目的基因的过程需不需要ATP?为什么?pcr PCR技术检测目的基因PCR不是用来获取目的基因吗?为什么书上说可以检测转基因生物是否含有目的基因?原理是什么?