作业帮超声法破碎细胞提蛋白质的具体步骤听说用超声破碎的方法提取蛋白质能节省很多蛋白，但是我一直比较困惑，用超声法提取蛋白不加蛋白裂解液了？至少我问的那个人他没有加，这个到底
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/06 03:10:28
超声法破碎细胞提蛋白质的具体步骤
听说用超声破碎的方法提取蛋白质能节省很多蛋白，但是我一直比较困惑，用超声法提取蛋白不加蛋白裂解液了？至少我问的那个人他没有加，这个到底怎么回事啊？
1、清洗后的的组织用搅切机切碎成小块,混悬在至少两倍体积的缓冲液内；洗去培养液的细胞,混悬在至少两倍体积的缓冲液中；
2、将超声探头没入混悬液内,进行超声破碎.一般总超声时间约2min,分为几个周期,如4×30s,周期之间让样品在冰浴中冷却.
总的过程就是这样,不用加裂解液.
请问楼主，可否将得到的最佳答案分享一下，在下也很需要了解。
这样说吧，如果我们用原核表达载体表达一段目标基因，我们先把这个基因通过酶切连接的原核表达载体上，再转化到大肠杆菌中进行诱导表达，常用的诱导物是IPTG，37度诱导表达4小时，这样表达出的目标蛋白一般以包涵体的形式存在细菌内，然后用超声破碎细菌，首先将吸取5ml的细菌放入试管中，然后放在超声仪中，开80hz的频率进行破碎细菌，待到细菌全部破碎，溶液变清亮为止，然后你可以洗涤沉淀，进行包涵体蛋白的收集...
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这样说吧，如果我们用原核表达载体表达一段目标基因，我们先把这个基因通过酶切连接的原核表达载体上，再转化到大肠杆菌中进行诱导表达，常用的诱导物是IPTG，37度诱导表达4小时，这样表达出的目标蛋白一般以包涵体的形式存在细菌内，然后用超声破碎细菌，首先将吸取5ml的细菌放入试管中，然后放在超声仪中，开80hz的频率进行破碎细菌，待到细菌全部破碎，溶液变清亮为止，然后你可以洗涤沉淀，进行包涵体蛋白的收集，后面你可以做一个SDS-PAGE蛋白质电泳和Western-blot，这样就可以确定你的要蛋白是不是你的蛋白。
最后，你可以大量的摇菌提取蛋白质了，祝你好运，我也是做这方面的研究，已经做到蛋白质电泳这一步了，祝你好运。
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