作业帮ELISA样品准备问题本人为实验新手,盲目中准备了病人的血清标本,然后才买了assay designs的human osteopontin elisa试剂盒,5000元左右.半年后才开始准备做实验,阅读了assay designs的human osteopontin elisa说
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/06/05 06:20:05
ELISA样品准备问题
本人为实验新手,盲目中准备了病人的血清标本,然后才买了assay designs的human osteopontin elisa试剂盒,5000元左右.半年后才开始准备做实验,阅读了assay designs的human osteopontin elisa说明书后才发现说明书的标本准备中要求用血浆样品.原话为“to avoid cleavage of OPN in plasma samples,PMSF shoud be added to a final concentration of 1 mM.It is not recommended to use serum or heparin plasma in this assay as the OPN is likely to be cleaved in this matrices.重新准备病人的血浆样本已经来不急了,是不是实验注定会失败啊?呜呜!请求指导!
哇,大家都曾经盲目过啊,patpat振作一下.
现在的情况是恐怕你无法使用该试剂盒和你的血清样本取得适宜于发表的数据.因为即使你做这个实验,你也说不清楚你的样本里面有多少OPN已经降解了,所得的测量值理论上来说不能很好的反映你需要研究的原始OPN浓度.
当然,如果现在这个试剂盒买了也是买了,不用掉也是浪费,等不及把它用在其他按要求采集的血浆样本上,你还是可以拿它来做以下实验,考虑一下你自己的时间和精力,值不值得这么做吧：
1.碰碰运气--如果出于神秘的原因你的血清样本中OPN没有损失或损失很小,那么你还是可以做这个实验.为了证明这一点,你可以用一个新的确定为阳性的捐献者,取血分两份,分别按照你的老办法制备血清,和按照ELISA建议办法制备血浆.然后用该试剂盒测试,对比两份样本的结果.如果结果相近,则说明你的血清制备办法不影响OPN,你可以按原计划做你的实验.
但这个实验也有个问题--同样体积的全血,则OPN数量固定,血清和血浆体积差异可能造成两个样本浓度不同,而且你的血浆要加PMSF,也是改变浓度的因素.所以到底最后结果相差多少视为可以接受,需要考虑一下.
同时你可以将已知浓度的重组OPN(试剂盒中带来的),加到你某个待测的血清样本中（不重要的或备有多余分量的）,同未加重组蛋白的同一个样本,还有等量重组蛋白加到普通稀释缓冲液中,三组同时测试,前两个结果差值是否为计算出来的OPN浓度,该差值是否与第三个结果相同.这样可以证明,在你的血清样本中,OPN到底会不会降解.但这里的问题是加完到底应该孵育多久,在什么温度下孵育.理论上应该比照你的血清样本制备过程的温度和时间.这里假定重组OPN与天然OPN在血清中的降解反应一样.
2.以上都是为了回答一个问题就是你的血清样本能不能用.但如果你的实验只是为了比较差异,不太在乎基准值,你还是可以不管三七二十一地就用这些样本测了.得到的结果对你私下来分析还是有参考价值--即你还是可以知道某些病人是否OPN比另外一些病人高,病人治疗前后OPN是变高了还是变低了.但是这样有个前提是你的OPN只是降解浓度变低了,没有低到测不到的地步.你也可能测了一通,血清样本用光光了（本来血清样本可能还可以有别的用途）,啥也没测到.