荧光PCR反应中,低浓度的扩增曲线会歪是什么原因?

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/14 04:56:44

荧光PCR反应中,低浓度的扩增曲线会歪是什么原因?

你说的标准品的浓度是和你的标本比较那个更低呢?如果标准品和标本在大概相同的CT值时只是标本曲线往下爬的话,我猜测是你的标本模板不干净,有抑制物进去了,因为曲线往下趴明显就是扩增效率的问题,扩增效率不高,有引物设计问题也有酶反应问题,既然你说标准品不会,那就说明引物设计没问题.
如果标准品的CT要比标本小很多,标本在低浓度下趴也很正常,当引物模板浓度低,如果PCR体系设计不是很牛逼的话低浓度时下趴是正常的.

判断扩增曲线是否良好的指标主要有几个方面:
l 曲线拐点清楚,特别是低浓度样本指数期明显,扩增曲线整体平行性好,基线平而无上扬现象,低浓度样本扩增曲线指数期明显。
l 曲线指数期斜率与扩增效率成正比,斜率越大扩增效率越高。
l 标准的基线平直或略微下降,无明显的上扬趋势。
各管的扩增曲线平行性好,表明各反应管的扩增...

全部展开

判断扩增曲线是否良好的指标主要有几个方面:
l 曲线拐点清楚,特别是低浓度样本指数期明显,扩增曲线整体平行性好,基线平而无上扬现象,低浓度样本扩增曲线指数期明显。
l 曲线指数期斜率与扩增效率成正比,斜率越大扩增效率越高。
l 标准的基线平直或略微下降,无明显的上扬趋势。
各管的扩增曲线平行性好,表明各反应管的扩增效率相近。
我认为是各反应管扩增效率差异有点大吧

收起

你指的歪是什么意思?

荧光PCR反应中,低浓度的扩增曲线会歪是什么原因? Mg2+离子浓度影响PCR扩增效率的机制?为什么浓度过高降低pcr扩增特异性,浓度过低影响PCR扩增产量? 荧光定量PCR扩增曲线基线过高什么原因 荧光定量PCR中扩增曲线能说明什么问题?还有溶解曲线能说明什么了? 荧光定量pcr标准曲线中的扩增效率太高怎么办做荧光定量标准曲线,同时做内参β-actin和自己的基因SA,结果内参相关系数为1.000,扩增效率为99.7%,SA相关系数为0.990,扩增效率为137.3%,初始模板浓度 荧光定量PCR做标准曲线,普通PCR扩增效果良好,荧光定量PCR标准曲线作图斜率只有1.02,是什么原因?引物浓度已经从0.6Ul,调整为0.8ul和1.0ul, pcr扩增反应中设置延伸的原因 低浓度模板,如何扩增清晰地PCR产物 实时荧光定量PCR结果中溶解曲线的 荧光定量PCR的扩增产物长度为什么不能太长? real-time PCR相对定量2 -△△CT法中用来判断扩增效率的标准曲线怎么制作?相对定量2 -△△CT法中建立标准曲线的目的是用来检测PCR的扩增效率的,那么这个标准曲线是如何制作的?我将未知浓度 荧光定量PCR熔解曲线本人菜鸟,刚接触荧光定量PCR,有一个问题,不知道溶解曲线中为什么有那么多线,每条线是不是代表一个循环?如果是的话为什么同时扩增的两个基因,内参基因溶解曲线图上 基因的PCR扩增技术实验中设置延伸反应的原因 荧光定量PCR相对定量,目的基因引物浓度不同,b-action需要以不同浓度扩增2次吗? 低浓度模板的PCR扩增我的PCR模板来自于第一次PCR产物聚丙烯电泳后的回收片段;然后继续用第一次的引物扩增回收的目的片段;因为回收后的模板浓度比较低,对于低浓度、短片段模板(100-20 荧光PCR时ct值大于30?现在在做荧光pcr,细胞的,12孔板,但是进行扩增时发现ct值大于30,一般在35左右,之后将循环数设置为60,才能见到完美的曲线,请教大家分析下出现的原因,附上溶解曲线和扩增 谁能具体解释一下荧光定量PCR中溶解曲线的意思以及作用? 我做荧光定量PCR标准曲线时,斜率只有-1.25,扩增效率E很高.为什么呢?