基因工程构建基因表达载体的问题构建载体时,假如某质粒有一酶切点(在一特定启动了和终止子之间),有一青霉素抗性基因(在一特定启动子和终止子外),有一四环素抗性基因(在一特定
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/14 15:03:48
基因工程构建基因表达载体的问题
构建载体时,假如某质粒有一酶切点(在一特定启动了和终止子之间),有一青霉素抗性基因(在一特定启动子和终止子外),有一四环素抗性基因(在一特定启动子和终止子间).构建载体后,如何用青霉素培养基和四环素培养基检测其为载体-载体连接物,目的基因-目的基因连接物,还是目的基因-载体连接物?
貌似是将受体细胞放入青霉素培养基,选出载体-载体连接物和目的基因-载体连接物,放人四环素培养基能存活的是载体-载体连接物。这是为什么?
请用我能理解的方式解释!
我估计这个构建是利用你提到的酶切位点在你所说的“特定启动子”和“终止子”之间插入目的基因,这样一来,如果构建成功,就会破坏了原来位于该“特定启动子”和“终止子”之间的四环素抗性基因,即“目的基因-载体连接物”不具有四环素抗性.又因为青霉素抗性基因在该特定启动子和终止子之外,无论构建是否成功,都不会影响青霉素的抗性.综上,“目的基因-载体连接物”的受体细胞具有青霉素抗性但不具有四环素抗性.因此,可以首先利用青霉素抗性筛选出全部连接产物(在青霉素抗性培养基上可以存活),然后再利用四环素抗性进行筛选剔除“载体-载体连接物”(这种连接没有破坏原有的四环素抗性).也就是说所有既抗青霉素又抗四环素的都丢掉,只留下只抗青霉素不抗四环素的克隆.不知道这样说你明白了吗?
1.用青霉素培养基和四环素培养基培养得到质粒.
2.用该切酶切提取的质粒
3.走DNA电泳胶, 如果是目的基因-载体连接物,可以看到目的基因被切得条带.
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构建基因表达载体的原因最好是专业语言,
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