作业帮pcr仪主要看什么参数
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/07 07:36:47
pcr仪主要看什么参数
主要是看升降温速度
还有就是温度准确性,热盖温度,实验通量（就是一次可以做多少样品）及其他的附加功能等等
PCR的循环参数1、预变性 模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要，建议加热时间参考试剂说明书，一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟。2、循环中的变性步骤 循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列完全变性，可能的情况下可 缩短该步骤时间 变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不彻底，易造成扩增失败。3、引物退火 退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm...
全部展开
PCR的循环参数1、预变性 模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要，建议加热时间参考试剂说明书，一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟。2、循环中的变性步骤 循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列完全变性，可能的情况下可 缩短该步骤时间 变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不彻底，易造成扩增失败。3、引物退火 退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm值为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。 退火温度对PCR的特异性有较大影响。4、引物延伸 引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略 延伸时间随扩增片段长短而定，一般推荐在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。5、循环数 大多数PCR含25-40循环，过多易产生非特异扩增。6、最后延伸 在最后一个循环后，反应在72℃维持5-15分钟．使引物延伸完全，并使单链产物退火成双链。 四PCR中的污染和假阳性 PCR中污染主要来自 1．样品间交叉污染； 2．先前PCR产物遗留
收起